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病理檢測

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特殊染色
ROS染色
周期:.
規(guī)格:片
貨號:PR-004177
單位:.
價格:詢價
品牌:行一生物

? 服務介紹

ROS染色原理是利用熒光探針(如Dihydroethidium,DHE)檢測細胞內活性氧(ROS)的水平。ROS主要包括超氧陰離子自由基、過氧化氫、羥自由基等。這些活性氧分子在細胞內參與多種生理和病理過程。在病理條件下,由于活性氧的產(chǎn)生和清除失去了正常平衡,會對組織細胞造成損傷。二氫乙錠(Dihydroethidium,DHE),可自由透過活細胞進入細胞內,并被細胞內的ROS氧化,形成氧化乙錠;氧化乙錠可摻入染色體DNA中,產(chǎn)生紅色熒光。根據(jù)活細胞中紅色熒光的產(chǎn)生,可以判斷細胞ROS含量的多少和變化。檢測ROS水平常用于凋亡、衰老、自噬、炎癥、缺血再灌注損傷、神經(jīng)退行疾病等領域的研究。ROS染色是活氧檢測,組織冰凍切片不能用固定液固定,最好是新鮮組織,ROS陰性細胞僅有較低的熒光強度,ROS陽性細胞有較強的紅色熒光。


? 實驗器材及主要實驗試劑

實驗器材

主要實驗試劑

? 實驗步驟

1.冰凍切片固定:切片于4%多聚甲醛固定5min,蒸餾水洗1min;PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
2.冰凍切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內滴加ROS染液(取1mgDihydroethidium于3.1mLDMSO中,得到1mMDihydroethidium),避光恒溫箱37℃孵育30min。
3.DAPI復染細胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加DAPI染液,避光室溫孵育10min。
4.封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
5.鏡檢拍照:切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm;FITC綠光激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555nm;CY3紅光激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm)。

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